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1.将随机提供的减压阀装在CO2钢瓶上，接头处不得有漏气现象，暂不打开钢瓶。将减压阀输出接头用胶管与CO2箱背后上方的CO2进气管街头相连，用压紧圈压紧，以防漏气。
2.用酒精将CO2箱工作室内擦净，在箱体后背打开紫外线灯电源开关，消毒1-2h。
3.用加水管连接水龙头和箱体左上侧加水口。水套式CO2箱一次操作。
4.接通电源，电源开关置“1”，绿色指示灯亮。
水套式CO2箱必须先进行加水操作。打开水龙头，缓慢给睡乡加水，随水位逐渐升高，当地水位指示灯灭后，此时再等3-5s，后停止加水，此时水位在低、高之间，水位灯均不亮，设备可投入运行。
将温度设定值调到需要的温度（例如37度），加热指示灯亮（绿）应亮，表示正在加热。（注：环境温度超出25度，可用空调降低环境温度）
将CO2控制开关置于“0”。
待温度达到设定值后，将CO2钢瓶开启，（开启前，减压阀应尽量拧松，防止减压阀输出压力过高导致橡皮管爆裂！）减压阀上进气压力表指示钢瓶内CO2压力，缓慢地顺时针拧减压阀旋钮。使减压阀输出压力指示为0.05MPa，指针处于刻度线中间。此时用拨盘设定CO2浓度（出厂时调整为5%），开启CO2控制开关前要关闭空气流量计和CO2流量计，CO2控制器显示“1”，此时即有CO2进入内室。随着浓度升高，CO2控制器显示出CO2浓度值，到设定值时，设备自动切换到空气及CO2补气状态。此时需调整空气流量计应指示在760ml/min（出厂时已经调好），CO2流量计浮子应指示在40ml/min（出厂时已经调好）；若浮子偏离上述数值时，可调节流量计旋钮到760ml/min（空气）及40ml/min（CO2）准确为止。
当温度达到设定值，波动±0.5℃以内，CO2浓度也到到要求后，即可进行细胞培养。放入水盘，使湿度符合要求。
在首次使用本机或长期不用后使用本机，均应按上述要求操作，并且在正式培养前应作箱内污染检。
5.关机
培养结束后，开箱门取出培养皿，将未培养皿重新放入（注意观察水盘中的蒸馏水是否需补充）。若停止培养，则应先将CO2钢瓶关闭，再将空气流量计和CO2流量计关闭,CO2进气开关置“0”。位置，最后关闭总电源。若长期不使用，应取出水盘，擦干工作室，在CO2进气开关关闭状态下，使CO2箱在37℃条件下开机2h，烘干工作室，再切断总电源。
6.温度调节办法
本机出厂时，以37℃为基准调好，如冬天箱内玻璃门上水雾大，无法看清箱内培养物，可在CO2箱内背后调节门温旋钮，向左旋动，即温度升高的方向，直至能看清箱内物品；如夏天，箱内实际温度高于设置温度时，则将调节旋钮向右旋转，即温度降低，直至箱内温度达到37℃。
7.风机调节方法
使用中，风量的大小不但会影响箱内温度的均匀度，直至影响控制温度。若在使用中，风量的过大影响到培养物品，则可在CO2箱后背调节风机转速旋钮，直至满足需要。
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